ლუიჯი რიკარდი 1 როზა მაზეო 2,*©, ანჯელო რაffაელე მარკოტრიჯიანო 1 , გულიელმო რაინალდი 3 , პაოლო იოვიენო 4 , ვიტო ზონო 1 , სტეფანო პავანი 1© და კონცეტა ლოტი 2,*
- 1 ნიადაგის, მცენარეთა და კვების მეცნიერებათა დეპარტამენტი, მცენარეთა გენეტიკა და მეცხოველეობის განყოფილება ბარის უნივერსიტეტი, Via Amendola 165/A, 70125 ბარი, იტალია; luigi.ricciardi@uniba.it (LR);angelo.marcotrigiano@uniba.it (ARM); vito.zonno@uniba.it (VZ); stefano.pavan@uniba.it (SP)
- 2 სოფლის მეურნეობის, საკვებისა და გარემოს მეცნიერებათა დეპარტამენტი, ფოჯის უნივერსიტეტი, Via Napoli 25, 71122 Foggia, Italy
- 3 ბიომეცნიერებების, ბიოტექნოლოგიებისა და ბიოფარმაცევტიკის დეპარტამენტი, ბარის უნივერსიტეტი, Via Orabona 4, 70125 ბარი, იტალია; guglielmo.rainaldi@uniba.it
- 4 ენერგეტიკული ტექნოლოგიების დეპარტამენტი, ბიოენერგეტიკა, ბიოფინერიისა და მწვანე ქიმიის სამმართველო, ENEA Trisaia Research Center, SS 106 Ionica, km 419+500, 75026 Rotondella (MT), იტალია; paolo.iovieno@enea.it
* მიწერ-მოწერა: rosa.mazzeo@unifg.it (RM); concetta.lotti@unifg.it (CL)
მოკლე აღწერა:
ხახვი (Allium cepa L.) არის მეორე ყველაზე მნიშვნელოვანი ბოსტნეული კულტურა მსოფლიოში და ფართოდ არის დაფასებული მისი ჯანმრთელობის სარგებლობისთვის. მიუხედავად მისი მნიშვნელოვანი ეკონომიკური მნიშვნელობისა და როგორც ფუნქციური საკვების ღირებულებისა, ხახვი ცუდად იყო გამოკვლეული მისი გენეტიკური მრავალფეროვნების თვალსაზრისით. აქ ჩვენ გამოვიკვლიეთ გენეტიკური ცვალებადობა "Acquaviva წითელი ხახვის" (ARO), ლანდშაფტის კულტივირების საუკუნოვანი ისტორიით ბარის პროვინციაში (აპულია, იტალიის სამხრეთი) პატარა ქალაქში. 11 მიკროსატელიტური მარკერების ნაკრები გამოიყენეს გენეტიკური ვარიაციის შესასწავლად გერპლაზმის კოლექციაში, რომელიც შედგება 13 ARO პოპულაციისა და სამი გავრცელებული კომერციული ტიპისგან. გენეტიკური სტრუქტურის ანალიზმა პარამეტრული და არაპარამეტრული მეთოდებით ხაზგასმით აღნიშნა, რომ ARO წარმოადგენს კარგად განსაზღვრულ გენოფონდს, აშკარად განსხვავებულ ტროპეას და მონტოროს ლანდშაფტებისგან, რომლებთანაც ხშირად ცდებიან. ბოლქვების აღწერილობის უზრუნველსაყოფად, რომლებიც ჩვეულებრივ გამოიყენება ახალი მოხმარებისთვის, შეფასდა ხსნადი მყარი შემცველობა და სიმკვეთრე, რაც აჩვენა ARO-ში უფრო მაღალი სიტკბო ზემოთ ჩამოთვლილ ორ ლანდშაფტთან მიმართებაში. მთლიანობაში, წინამდებარე კვლევა სასარგებლოა ARO-ს მომავალი ვალორიზაციისთვის, რომელიც შეიძლება ხელი შეუწყოს ხარისხის ეტიკეტების საშუალებით, რაც ხელს შეუწყობს კომერციული თაღლითობის შეზღუდვას და მცირე მესაკუთრეების შემოსავლის გაუმჯობესებას.
შესავალი
Allium გვარი მოიცავს დაახლოებით 750 სახეობას [1], რომელთა შორის ხახვი (Allium cepa L., 2n = 2x =16) ერთ-ერთი ყველაზე გავრცელებულია. A. cepa-ს აქვს ორწლიანი ციკლი და გადაკვეთის რეპროდუქციული ქცევა. დღესდღეობით ხახვის გლობალური წარმოება (97.9 მტ) ხდის მას მეორე ყველაზე მნიშვნელოვან ბოსტნეულ კულტურას პომიდვრის შემდეგ [2]. უძველესი დროიდან ხახვის ბოლქვები გამოიყენებოდა როგორც საკვებად, ასევე ხალხურ სამკურნალო მიზნებში. მართლაც, ძველ ეგვიპტელებს უკვე მოხსენებული ჰქონდათ რამდენიმე თერაპიული ფორმულა, რომელიც ეფუძნებოდა ნივრის და ხახვის გამოყენებას ჩვენს წელთაღრიცხვამდე 1550 წლის სამედიცინო პაპირუსში, Codex Ebers [3].
ეს მრავალმხრივი და ჯანსაღი ბოსტნეული მოიხმარება უმი, ახალი ან დამუშავებული პროდუქტის სახით და გამოიყენება მრავალი კერძის გემოს გასაუმჯობესებლად. რამდენიმე ბოლო კვლევა ამტკიცებს, რომ ხახვის მოხმარებამ შეიძლება შეამციროს გულ-სისხლძარღვთა დაავადებების [4,5], სიმსუქნის [6], დიაბეტის [7] და კიბოს სხვადასხვა ფორმების რისკი [8-10]. ხახვის ჯანმრთელობის თვისებები ხშირად მიეკუთვნება ორი კლასის საკვებ ნაერთების მაღალ დონეს: ფლავონოიდებს და ალკ(ენ)ილ ცისტეინის სულფოქსიდებს (ACSOs). პირველ კლასში შედის ფლავონოლები და ანთოციანინები. კვერცეტინი არის მთავარი შესამჩნევი ფლავონოლი, რომელიც ცნობილია თავისი ძლიერი ანტიოქსიდანტური და ანთების საწინააღმდეგო თვისებებით თავისუფალი რადიკალების დაცლისა და გარდამავალი ლითონის იონების შეკავშირებაში. [11]; ხოლო ანთოციანინები ხახვის ზოგიერთ სახეობას წითელ/მეწამულ ფერს ანიჭებენ. რაც შეეხება ACSO-ებს, ყველაზე უხვი არის იზოალინი [(+)-ტრანს-S-1-პროპენილ-L-ცისტეინის სულფოქსიდი] [12]უჯრედებში შენახული არაასტაბილური და არაპროტეინოგენური გოგირდის ამინომჟავა, რომელიც ირიბად პასუხისმგებელია ხახვის მკვეთრ არომატსა და გემოზე. [13]. ქსოვილის დაშლისას, იზოალინი იშლება ფერმენტ ალიინაზას მიერ, რათა წარმოქმნას არასტაბილური ნაერთების სერია (პირუვატი, ამიაკი, თიოსულფონატები და პროპანეთიალური S-ოქსიდი), რომლებიც იწვევენ ცრემლდენას და იწვევს უსიამოვნო სუნს (მწვავე). [14]. ხახვის სიმკვეთრე ხშირად იზომება, როგორც ჰიდროლიზის შედეგად წარმოქმნილი პირუვინის მჟავის რაოდენობა, თითო გრამ სუფთა წონაზე. [15,16].
ხმელთაშუა ზღვის აუზის ქვეყნებში შემოთავაზებულია, როგორც ერთ-ერთი მეორადი მრავალფეროვნების ცენტრი A. cepa [17,18]ხახვის ბოლქვები ავლენენ ფართო ცვალებადობას ფორმაში, ზომაში, ფერში, მშრალ ნივთიერებასა და სიმკვეთრეში [19-22]. გარდა ამისა, გოგირდზე დაფუძნებული განაყოფიერება, აგრონომიული პრაქტიკა, ნიადაგის ტიპი, კლიმატური პირობები და ჯიშების ან ლანდშაფტების გენოტიპი შეიძლება გავლენა იქონიოს ბოლქვის ხარისხზე თავისებური ორგანოლეპტიკური და კვების ღირებულებების მინიჭებით. [23-27]. იტალიაში, ხახვის ჩანასახის ფართო ხელმისაწვდომობის მიუხედავად, ხახვის მხოლოდ რამდენიმე სახეობა ხშირად ექვემდებარება სამეცნიერო კვლევებს და სათანადოდ ახასიათებს. [28,29].
აგრობიომრავალფეროვნების სრულყოფილად გენეტიკური და ფენოტიპური დახასიათება გადამწყვეტია მცენარეთა გენეტიკური რესურსების სათანადო კონსერვაციის უზრუნველსაყოფად და ღირებულების ჯაჭვში კონკრეტული გენოტიპების გამოყენების ხელშეწყობისთვის. [30-32]. მარტივი მიმდევრობის გამეორების (SSR) მარკერები ხშირად არჩეულია რუკებისთვის [33-35], დნმ-ის თითის ანაბეჭდი და ჯიშის დისკრიმინაცია [36-38]და გენეტიკური ცვალებადობის საიმედო შეფასება ლანდშაფტებში და მათ შორის [39-42], ვინაიდან ისინი ლოკალური სპეციფიკურია, მრავალ ალელური, კოდომინანტად მემკვიდრეობითი, მაღალი რეპროდუცირებადი და შესაფერისია ავტომატური გენოტიპისთვის.
წინამდებარე კვლევაში ჩვენ ყურადღება გავამახვილეთ აპულიის ტრადიციულ ლანდრასზე, "Acquaviva წითელი ხახვი" (ARO), რომელიც გაშენებულია ორგანული მეურნეობის მეთოდების მიხედვით ქალაქ Acquaviva delle Fonti-ის პატარა ტერიტორიაზე, ბარის პროვინციაში. (აპულია, სამხრეთ იტალია). ამ ლანდრასის ბოლქვები დიდი და გაბრტყელებული და წითელი ფერისაა და ძირითადად გამოიყენება ადგილობრივ რეცეპტებში. მიუხედავად იმისა, რომ ARO-მ მოიპოვა "Slow Food Presidium" ხარისხის ნიშანი, მისი წარმოება შეიძლება შემდგომი ხელშეწყობა და დაცვა ევროკავშირის ხარისხის ნიშნებით, როგორიცაა დაცული გეოგრაფიული აღნიშვნა (PGI) და დაცული წარმოშობის აღნიშვნა (POD), რადგან ამან შეიძლება ხელი შეუწყოს შეზღუდოს კომერციული თაღლითობები და მცირე მესაკუთრეთა შემოსავლის გაუმჯობესება. აქ, SSR მოლეკულური მარკერები გამოიყენებოდა, როგორც ძლიერი ინსტრუმენტები გენეტიკური ვარიაციის შესაფასებლად ARO პოპულაციებს შორის და ამ ლანდრასის განასხვავებლად სხვა სამხრეთ იტალიის წითელი ხახვის ლანდშაფტისგან. გარდა ამისა, ჩვენ შევაფასეთ სიმკვეთრე და ხსნადი მყარი შემცველობა, რათა შევაფასოთ ARO-ს არომატი ბაზრის მოთხოვნასთან მიმართებაში.
შედეგები
Acquaviva წითელი ხახვის ჩანასახის კოლექციის და მორფოლოგიური დახასიათების დაარსება
ARO ლანდშაფტის 13 პოპულაციის თესლები, რომლებიც შემოწირულ იქნა ფერმერების მიერ BiodiverSO Apulia Region-ის პროექტის ფარგლებში, გამოყენებული იქნა ARO germplasm-ის კოლექციის შესაქმნელად.
მორფოლოგიური აღწერები, დაკავშირებული ბოლქვთან, კანთან და ხორცთან, შეგროვდა ARO-ს გერპლაზმაზე და ხახვის სამ ლანდრასზე, ორი მიეკუთვნებოდა "Tropea წითელი ხახვის" (TRO) და ერთი "Montoro სპილენძის ხახვი" (MCO) ლანდრასს (სურათი 1). ყველა ARO ნათურა ბრტყელი იყო და ახასიათებდა წითელი გარეგანი კანი და ხორცი წითელი ფერის სხვადასხვა ელფერით. ამის საპირისპიროდ, TRO ნათურების ხორცი მთლიანად წითელი იყო, ხოლო MCO ნათურების ხორცი ცუდად პიგმენტირებული იყო (ცხრილი S1). ბიოქიმიური ანალიზი საშუალებას იძლევა შეფასდეს მყარი ხსნადი შემცველობა და სიმკვეთრე. როგორც იტყობინება ცხრილში 1, ნათურების მყარი ხსნადი შემცველობის საშუალო მნიშვნელობები ARO პოპულაციებში იყო 7.60 და მერყეობდა 6.00 (ARO12)-დან 9.50° Brix-მდე (ARO11 და ARO13). ეს მნიშვნელობა უფრო მაღალი იყო, ვიდრე შეფასებული TRO და MCO ლანდრასებისთვის (4.25 და 6.00° Brix, შესაბამისად).
მაგიდა 1. მყარი ხსნადი შიგთავსისა და სიმკვრივის მნიშვნელობები შეფასებული "Acquaviva Red Onion" (ARO), "Tropea Red Onion" (TRO) და "Montoro Copper ხახვი" (MCO) პოპულაციებში *.
კოდი | ხსნადი მყარი შიგთავსი (Brix) | სიმსივნე (pმოლგი-1 FW) | ||
ნიშნავს | CV y (%) | ნიშნავს | CV y (%) | |
ARO1 | 6.25 D * | 5.65 | 5.84 ab * | 23.78 |
ARO2 | 7.25 DC | 4.87 | 6.51 | 22.98 |
ARO3 | 7.50 BCD | 9.42 | 5.28 აბ | 22.88 |
ARO4 | 7.50 BCD | 0.00 | 6.97 | 3.74 |
ARO 5 | 7.50 BCD | 0.00 | 6.80 | 9.68 |
ARO6 | 6.25 D | 5.65 | 4.51 აბ | 39.18 |
ARO7 | 7.25 DC | 4.87 | 5.25 აბ | 15.44 |
ARO8 | 9.00 AB | 0.00 | 7.04 | 3.49 |
ARO9 | 8.25 ABC | 4.28 | 6.84 | 0.15 |
ARO10 | 7.00 DC | 0.00 | 5.94 აბ | 6.57 |
ARO11 | 9.50 | 7.44 | 5.54 აბ | 16.43 |
ARO12 | 6.00 D | 0.00 | 4.91 აბ | 9.70 |
ARO13 | 9.50 | 7.44 | 6.63 | 24.93 |
MCO | 6.00 D | 0.00 | 4.18 აბ | 2.66 |
TRO1 | 4.25 E | 8.31 | 2.80 ბ | 2.10 |
TRO2 | 4.25 E | 8.31 | 4.28 აბ | 4.79 |
* დიდი ან პატარა ასოების მქონე საშუალოები სტატისტიკურად არ განსხვავდება 0.01P ან 0.05P, შესაბამისად (SNK-ის ტესტი). y ვარიაციის კოეფიციენტი.
ARO სიმკვეთრის საშუალო მნიშვნელობა, შეფასებული პირუვინის მჟავას შემცველობის მიხედვით, იყო 6.00, მერყეობდა 4.51 pmolg-დან.-1 FW (ARO6) 7.04-მდე (ARO8). ეს მნიშვნელობა უფრო მაღალი იყო, ვიდრე შეფასებული TRO და MCO ლანდშაფტებში (3.54 pmol g-1 FW და 4.18 pmol g-1 FW, შესაბამისად).
სსრ პოლიმორფიზმი და გენეტიკური კავშირები კავშირებს შორის
წინამდებარე კვლევაში, 11 შემოწმებული SSR პრაიმერის კომბინაციიდან 37-მა უზრუნველყო ერთი ლოკუსური პოლიმორფიზმები, ე.ი. გამოიმუშავებდა მაქსიმუმ ორ გამაძლიერებელ პროდუქტს ერთ ინდივიდში. საერთო ჯამში, 55 ალელი გამოვლინდა 320 ინდივიდში ალელების რაოდენობა ლოკუსზე 2-დან (ACM147 და ACM 504) 11-მდე (ACM132) და საშუალო მნიშვნელობა 5 ალელის (ცხრილი) 2). ცალკეულ პოპულაციებში, ალელების რაოდენობა (Na) მერყეობდა 1.94-დან (ACM147 და ACM504) 5.38-მდე (ACM132), ხოლო ალელების ეფექტური რაოდენობა (Ne) მერყეობდა 1.41-დან (ACM152) 2.82-მდე (ACM449). შეუსაბამობები Na და Ne მნიშვნელობებს შორის განპირობებული იყო პოპულაციებში დაბალი სიხშირით ალელების არსებობით და მხოლოდ რამდენიმე ალელის დომინირებით. ჰეტეროზიგოტიურობის (Ho) უმაღლესი დაფიქსირებული მნიშვნელობა ხაზგასმული იყო ACM138 და ACM449 (0.62), ხოლო ყველაზე დაბალი ასოცირებული იყო ACM152-თან (0.25). მოსალოდნელი ჰეტეროზიგოტურობა (He), რომელიც შეესაბამება თეორიულ მოლოდინს პანმიქტიკურ პოპულაციაში, მერყეობდა 0.37-დან (ACM504) 0.61-მდე (ACM132, ACM138 და ACM449). რაიტის ფიქსაციის ინდექსი (Fis), აჩვენებს მნიშვნელობებს ნულთან ახლოს (საშუალოდ 0.05) ყველა მარკერისთვის, რაც მიუთითებს მსგავს მნიშვნელობებზე დაკვირვებულ და მოსალოდნელ ჰეტეროზიგოზურ დონეებს შორის, როგორც მოსალოდნელია გადაკვეთის სახეობებისთვის. ინდივიდუალური SSR მარკერის ეფექტურობა გენეტიკური თითის ანაბეჭდის დროს შეფასდა პოლიმორფული ინფორმაციის შემცველობის (PIC) ინდექსით, საშუალო მნიშვნელობით 0.48 და მერყეობდა 0.33-დან (ACM504) 0.67-მდე (ACM132). ეფექტურობის კიდევ ერთი ინდექსი, Shannon's Information Index (I) აჩვენებდა საშუალო მნიშვნელობას 0.84 და სავარაუდო მნიშვნელობები მერყეობდა 0.45-დან (ACM152) 1.20-მდე (ACM132).
მაგიდა 2. 11 SSR მარკერის პოლიმორფიზმის მახასიათებლები, რომლებიც გამოიყენება გენეტიკური მრავალფეროვნების შესაფასებლად ARO, TRO და MCO პოპულაციებში. ალელების ჯამური რაოდენობა (Na), ზოლის ზომის დიაპაზონი და პოლიმორფული საინფორმაციო შინაარსის (PIC) ინდექსი იხილეთ ამ კვლევაში გენოტიპირებული 320 ინდივიდის საერთო ნაკრები. ალელების რაოდენობა (Na), ეფექტური ალელების რაოდენობა (Ne), დაკვირვებული ჰეტეროზიგოტურობა (Ho), მოსალოდნელი ჰეტეროზიგოტურობა (He), ფიქსაციის ინდექსი (Fis) და შენონის ინფორმაციის ინდექსი (I) ეხება საშუალო მნიშვნელობებს, რომლებიც გამოითვლება 16 პოპულაციიდან, თითოეული შედგება 20 ინდივიდისგან.
ლოკუსი. | სულ ნა | ზომის დიაპაზონი (bp) | PIC | ნიშნავს | |||||
Na | Ne | Ho | He | I | Fis | ||||
ACM91 | 4 | 189-205 | 0.40 | 2.63 | 1.72 | 0.38 | 0.39 | 0.66 | 0.04 |
ACM101 | 4 | 229-241 | 0.52 | 2.94 | 2.37 | 0.53 | 0.56 | 0.92 | 0.06 |
ACM132 | 11 | 186-248 | 0.67 | 5.38 | 2.78 | 0.55 | 0.61 | 1.20 | 0.09 |
ACM138 | 5 | 242-272 | 0.66 | 3.69 | 2.82 | 0.62 | 0.61 | 1.09 | -0.02 |
ACM147 | 2 | 264-266 | 0.37 | 1.94 | 1.83 | 0.44 | 0.44 | 0.62 | -0.01 |
ACM152 | 4 | 228-244 | 0.25 | 2.38 | 1.41 | 0.25 | 0.27 | 0.45 | 0.07 |
ACM235 | 4 | 286-298 | 0.41 | 2.81 | 1.77 | 0.44 | 0.41 | 0.72 | -0.06 |
ACM446 | 6 | 108-120 | 0.56 | 3.50 | 2.48 | 0.49 | 0.58 | 1.01 | 0.16 |
ACM449 | 8 | 120-140 | 0.66 | 4.88 | 2.82 | 0.62 | 0.61 | 1.18 | -0.03 |
ACM463 | 5 | 202-210 | 0.47 | 3.38 | 1.95 | 0.46 | 0.48 | 0.83 | 0.05 |
ACM504 | 2 | 188-192 | 0.33 | 1.94 | 1.64 | 0.30 | 0.37 | 0.54 | 0.20 |
ნიშნავს | 5 | 0.48 | 3.22 | 2.15 | 0.46 | 0.48 | 0.84 | 0.05 |
პოპულაციებს შორის ARO3, ARO6, ARO8, ARO10, TRO1 და MCO აჩვენებდნენ გენეტიკური ვარიაციის მაღალ დონეს (Ho > 0.5), ხოლო ყველაზე დაბალი მრავალფეროვნება დაფიქსირდა ARO7 პოპულაციაში (Ho = 0.27) (დამატებითი ცხრილი S2). საერთო ჯამში, ყველა შეერთება ნაჩვენებია Fis ნულთან ახლოს მყოფი მნიშვნელობები (Fis საშუალო მნიშვნელობა = 0.054), როგორც მოსალოდნელი იყო შემთხვევითი შეჯვარების პირობებში.
მოლეკულური ვარიაციისა და გენეტიკური სტრუქტურის ანალიზი
გენეტიკური ვარიაციის იერარქიული დაყოფა პოპულაციებს შორის და შიგნით გამოითვალა AMOVA-ს მიერ. შედეგებმა აჩვენა გენეტიკური ცვალებადობის მნიშვნელოვანი ნაწილი პოპულაციებში (87%). ცვალებადობა პოპულაციებს შორის, 13%, იყო ძალიან მნიშვნელოვანი (P < 0.001) (ცხრილი 3). Fpt პარამეტრის წყვილი მნიშვნელობები, რაიტის Fst ფიქსაციის ინდექსის ანალოგი, 0.002 (ARO2/ARO10) 0.468 (ARO7/TRO2) მერყეობდა, მნიშვნელოვანი იყო (P < 0.05), გარდა ცხრა წყვილი შედარებისა (დამატებითი ცხრილი S3).
მაგიდა 3. 320 გენოტიპის მოლეკულური ვარიაციის ანალიზი 16 პოპულაციიდან ალიუმ ცეპა L.
წყარო | df | კვადრატების ჯამი | ვარიაციის შეფასება | ვარიაცია (%) | Fpt | P |
პოპულაციებს შორის | 15 | 458.63 | 1.16 | 13% | ||
პოპულაციების ფარგლებში | 304 | 2272.99 | 7.50 | 87% | 0.134 | 0.001 |
სულ | 319 | 2731.62 | 8.66 |
გენეტიკური სტრუქტურის გამოკვლევა A. cepa ამ კვლევაში გენოტიპირებული კოლექცია განხორციელდა პროგრამულ STRUCTURE-ში დანერგილი დანამატის მოდელზე დაფუძნებული კლასტერული ანალიზის საშუალებით. Evanno AK მეთოდმა შემოგვთავაზა ქვედანაყოფი ორ კლასტერად (K = 2), როგორც ყველაზე ინფორმაციული ჩვენთვის. მონაცემთა ბაზა,თe შემდეგი უმაღლესი პეak-ზე კ = 5 (შეავსებს Rgure S1). კ = 2, ahpopულაციები wერე უკანალიigned ოnდაf ორი მტევანი ერთად rnernbertoip კოეფიციენტი (q) > 0.7. როგორც სhoშედი გაერკვნენ 2aპირველი კლასტერი (სახელწოდებით S1) მოიცავდა MCO და ყველა ARO პოპულაციას, ხოლო S2 კლასტერმა დააჯგუფა ორი TRO პოპულაცია. K = 5-ზე, უზრუნველყოფს მონაცემთა ნაკრების უფრო ღრმა აღწერას (სურათი 2b), შეერთებების 75% მინიჭებული იყო ხუთიდან ერთ-ერთ კლასტერზე. ARO (S1) და TRO (S2) შორის განცალკევება დადასტურდა, თუმცა ზოგიერთი ARO პოპულაცია იყო შერეული (q <0.7) ან დაჯგუფებული ცალკე ორ ახალ კლასტერში S3 და S4 (ARO7 და ARO12, შესაბამისად). საინტერესოა, რომ MCO კომერციულმა ტიპმა ჩამოაყალიბა მკაფიო კლასტერი (S5) გამოყოფილი აპულიური წითელი ხახვისგან.
გენეტიკური ურთიერთობები პოპულაციებს შორის
SSR პოლიმორფიზმი საშუალებას გაძლევთ დახაზოთ გენეტიკური მრავალფეროვნების დენდროგრამა და ფილოგენეტიკური ანალიზის შედეგები ნაჩვენებია სურათზე 3a. აქ გერპლაზმის კოლექცია დაყოფილი იყო ხუთ ჯგუფად, რომლებიც მყარად მხარდაჭერილია bootstrap მნიშვნელობებით. ARO7 და ARO12 პოპულაციები დაუყონებლივ გამოეყო დარჩენილი პოპულაციებისგან და შექმნეს ორი განსხვავებული კლასტერი. მესამე კლასტერი მოიცავდა TRO-ს ორ კომერციულ პოპულაციას, იმავდროულად მეოთხე კვანძმა გაყო MCO თერთმეტი ARO პოპულაციისგან. პოპულაციებს შორის არსებული გენეტიკური კავშირი შემდგომ იქნა გამოკვლეული ძირითადი კოორდინატთა ანალიზის (PCoA) საშუალებით (სურათი 3b). როგორც ადრე აღინიშნა, ARO პოპულაციები მჭიდროდ იყო დაჯგუფებული, გარდა ARO12-ისა და ARO7-ისა, რომლებიც გამოჩნდნენ იზოლირებულ პოზიციებზე PcoA ნაკვეთზე. ორი TRO და MCO პოპულაციები მიმოფანტული იყო ნაკვეთის ქვედა მარჯვენა პანელში.
ფიგურა 3. გენეტიკური მრავალფეროვნება 16-ს შორის A. cepa ამ კვლევაში დამახასიათებელი პოპულაციები, მათი SSR პროფილის საფუძველზე. (a) გენეტიკური მანძილის UPGMA დენდროგრამა. Bootstrap-ის მხარდაჭერის მნიშვნელობები >50 მითითებულია შესაბამისი კვანძების ზემოთ; (b) ძირითადი კომპონენტის ანალიზი (PCoA). წითლად შემოხაზული მტევანი სრულად ემთხვევა ფილოგენეტიკური ანალიზის შედეგად წარმოქმნილ ჯგუფს და შედგება 11 ARO შეერთებით.
დისკუსია
სამხრეთ იტალიაში ტრადიციულად გაშენებული აგრობიომრავალფეროვნების დიდი რაოდენობით, ხახვის ლანდშაფტები წარმოადგენს ნიშურ პროდუქტებს, რომლებიც უნდა იყოს დაცული გენეტიკური ეროზიის რისკისა და თანამედროვე ჯიშებით ჩანაცვლების საფრთხისგან. რეგიონული პროექტის BiodiverSO-ს ფარგლებში, რომელიც მიზნად ისახავს აპულიის რეგიონის გენეტიკური რესურსების შეგროვებას, დახასიათებას, პოპულარიზაციას და დაცვას, რომელიც მჭიდროდ არის დაკავშირებული ადგილობრივ მემკვიდრეობასთან, ჩვენ დავაარსეთ 13 პოპულაციის თესლის კოლექცია ARO ლანდშაფტისგან. ჩვენ მოხსენებული გვაქვს ARO ვარიაციის პირველი შეფასება დნმ-ის პოლიმორფიზმისა და ორი ბიოქიმიური პარამეტრის, ხსნადი მყარი და პირუვინის მჟავას შემცველობის თვალსაზრისით, რომლებიც დაკავშირებულია გემოს მახასიათებლებთან და მნიშვნელოვანია ახალი მოუმზადებელი პროდუქტების მიღებისთვის. გარდა ამისა, მონაცემები ARO ლანდრასის შესახებ შედარებული იყო ორ სხვა პიგმენტურ ხახვის ჯიშზე შეგროვებულ მონაცემებთან, რომლებსაც ის ხშირად ცდება.
ბიოქიმიურმა ანალიზებმა ხაზგასმით აღნიშნეს 13 ARO პოპულაციის სიტკბო, რომელიც დაკავშირებულია მაღალ ხსნად მყარ შემცველობასთან და საშუალო სიმკვეთრესთან, ტკბილი ხახვის ინდუსტრიის მითითებების შესაბამისად. [31]. ARO ნათურები უფრო ტკბილი იყო, ვიდრე TRO და MCO ლანდრასების ნათურები და აჩვენებდნენ ოდნავ მაღალ სიმკვეთრეს. თუმცა, ხახვში სიტკბო განპირობებულია ბალანსით შაქრის შემცველობასა და მჟავიანობას შორის, ამიტომ ეს დახასიათება შეიძლება სასარგებლო იყოს ღირებული გენოტიპების შერჩევის მხარდასაჭერად, რომელსაც ჩვეულებრივ ფერმერები ახორციელებენ მხოლოდ მორფოლოგიის საფუძველზე.
SSR მარკერები დადასტურდა, რომ იყო სასარგებლო ინსტრუმენტი გენოტიპების დისკრიმინაციისთვის, თუმცა შეგროვებული ვიწრო მზარდი ზონაში, როგორიცაა ქალაქი Acquaviva delle Fonti. არჩეული მარკერები აჩვენებდნენ ალელების უფრო მეტ რაოდენობას, ვიდრე ადრე მოხსენებული მარკერები [43] მდე [44], მაგრამ უფრო დაბალია, ვიდრე მოხსენებული მარკერები [45]. უფრო მეტიც, ჩვენი მარკერების ნაკრების 50%-მა აჩვენა PIC ინდექსის მნიშვნელობები 0.5-ზე მეტი, რაც შესაფერისია კოლექციაში პოპულაციების დისკრიმინაციისთვის, როგორც ამას გვთავაზობს [46]. პოპულაციებში მრავალფეროვნების შეფასებამ გამოავლინა მსგავსი მნიშვნელობები Ho-სა და He-ს შორის, რის შედეგადაც დაბალი Fis ღირებულებები. ეს ეთანხმება გარე გადაკვეთის ბუნებას A. cepa, რომელიც სერიოზულად განიცდის შეჯვარების დეპრესიას [47]. საერთო Fis ამ კვლევაში განხილულ ხახვის პოპულაციებში გამოთვლილი მნიშვნელობა (0.054) უფრო დაბალი იყო ვიდრე ადრე მოხსენებული [45] (0.22) და თითქმის იდენტურია, როგორც ნაპოვნი [31] (0.08) და [48] (0.00), რომლებმაც შეაფასეს გენეტიკური მრავალფეროვნება ხახვის ლანდშაფტებში, შესაბამისად, ჩრდილო-დასავლეთ ესპანეთიდან და ნიგერიდან. ჰეტეროზიგოტიურობის საყურადღებო დონეები ARO პოპულაციებში აძლიერებს მოსაზრებას, რომ აპულია წარმოადგენს მრავალფეროვნების ცენტრს მებაღეობის მრავალი სახეობისთვის. [32, 42, 49-51].
AMOVA-მ ხაზგასმით აღნიშნა, რომ ამ კვლევაში გენოტიპურ კოლექციაში ყველაზე მეტი მოლეკულური ცვალებადობა პოპულაციების ფარგლებშია. თუმცა, მნიშვნელოვანი გენეტიკური დიფერენციაცია პოპულაციებს შორის (FPT ღირებულებები) გამოავლინა გენეტიკური სტრატიფიკაციის წარმოქმნა. სინამდვილეში, მიუხედავად იმისა, რომ ჩვენმა შედეგებმა აჩვენა გენეტიკური ერთგვაროვნების არსებობა ARO პოპულაციების უმეტესობაში, რომელიც ქმნიდა კარგად განსაზღვრულ კლასტერს, ARO7 და ARO12 პოპულაციები აჩვენებდნენ აშკარად მკაფიო გენეტიკურ პროფილს. ეს შედეგი შეიძლება გამოწვეული იყოს ორი ფერმერის მიერ გამოყენებული თესლის განსხვავებული წარმოშობით, საიდანაც შეგროვდა პოპულაციები. უფრო მეტიც, მიღებული შედეგების საფუძველზე, ARO ლანდრასი შეიძლება ჩაითვალოს გენეტიკურ დონეზე აშკარად განსხვავებულად TRO და MCO ლანდრასებისგან. ბოლო კვლევაში, [29] შეაფასა რამდენიმე იტალიური ხახვის ჯიშის გენეტიკური მრავალფეროვნება, მათ შორის "Acquaviva", "Tropea" და "Montoro". მიუხედავად იმისა, რომ ავტორებმა გამოიყენეს SNP მარკერები ხახვის ფართო კოლექციის გენეტიკური მრავალფეროვნების შესაფასებლად, გენოტიპმა ვერ შეძლო "Acquaviva"-ს "Tropea" და "Montoro" ხახვისგან განსხვავება. ალბათ, ეს შეუსაბამობა გამოწვეულია ნაპოვნი დაბალი საშუალო PIC მნიშვნელობით (0.292), რაც მიუთითებს ანალიზის ქვეშ მყოფი ლოკების მოკრძალებულ ზოგად ინფორმატიულობაზე, როგორც ამას ამტკიცებს. [29]. გარდა ამისა, მათ იტალიურ კლასტერში ქვესტრუქტურის არსებობის გამოსაკვლევად უკეთესი იქნებოდა იტალიური გენოტიპების ანალიზი დანარჩენი კოლექციისგან განცალკევებით. ალბათ ეს საშუალებას მისცემს გენეტიკური მრავალფეროვნების ნიმუშის ვიზუალიზაციას, რომელიც დაკავშირებულია გეოგრაფიულ სტრატიფიკაციასთან ან მახასიათებლებთან ემპირიული შერჩევის პირობებში.
დასასრულს, წინამდებარე კვლევა წარმოადგენს ყოვლისმომცველ ანგარიშს ხახვის ლანდშაფტის შესახებ, რომელიც დაკავშირებულია ადგილობრივ კულტურულ მემკვიდრეობასთან და ფერმერებისთვის ეკონომიკური მნიშვნელობის მქონე. ჩვენი შედეგები ხაზს უსვამს, რომ რამდენიმე გამონაკლისის გარდა, ARO ხასიათდება კარგად განსაზღვრული გენოფონდით, რომელიც იმსახურებს დაცვას გენეტიკური ეროზიის რისკისგან. ამიტომ, გენეტიკური მრავალფეროვნების ამ ღირებული წყაროს წარმომადგენლობითი კოლექციის შექმნა გადამწყვეტი იყო. და ბოლოს, ARO-ს გენეტიკური და ფენოტიპური დახასიათება შეიძლება სასარგებლო იყოს ევროკავშირის ხარისხის ნიშნების მისაღებად.
კვლევის მასალა და მეთოდები
ჩანასახის შეგროვება, მცენარეული მასალა და დნმ-ის ექსტრაქცია
ARO ლანდშაფტის 13 პოპულაციის ნაკრები შეძენილი იქნა აპულიის რეგიონის პროექტის ფარგლებში (BiodiverSO: https://www.biodiversitapuglia.it/), მისიების სერიის მეშვეობით, რომელიც განხორციელდა "Acquaviva delle Fonti", პატარა აპულიურ ქალაქში, ბარის პროვინციაში, იტალია. თითოეული შეერთების შეგროვების ადგილები დაფიქსირდა გეოგრაფიული საინფორმაციო სისტემის (GIS) მეშვეობით და მოხსენებული იყო ცხრილში 4. გარდა ამისა, ორი პოპულაცია TRO ლანდშაფტიდან და ერთი პოპულაცია MCO ლანდშაფტიდან ჩართული იყო წინამდებარე კვლევაში და გამოყენებული იქნა ცნობად. მთელი მცენარეული მასალა გაიზარდა ერთსა და იმავე გარემო პირობებში ბარის უნივერსიტეტის ექსპერიმენტულ ფერმაში „P Martucci“ (41° 1'22.08″ N, 16°54'25.95″ E), დაცვის გალიაში, რათა თავიდან იქნას აცილებული ჯვარედინი დამტვერვა. პოპულაციები და პოპულაციაშიდა დამტვერვის უზრუნველყოფა ბუზების საშუალებით (ლუსილია კეისარი). 16 პოპულაცია დახასიათებული იყო ბოლქვის ზომასა და ფორმასთან და კანისა და ხორცის ფერთან დაკავშირებული თვისებებით (ცხრილი S1). გარდა ამისა, მყარი ხსნადი შემცველობის ანალიზი ჩატარდა ხელის რეფრაქტომეტრის გამოყენებით და სიმკვეთრე გაზომილი იყო ხახვის წვენის ნიმუშებში 2,4-დინიტროფენილ ჰიდრაზინის დამატებით (0.125%) v/v HCl-ის 2N-ში) და შთანთქმის შეფასება 420 ნმ-ზე, როგორც მოხსენებულია [31]. დუნკანის მრავალჯერადი დიაპაზონის ტესტი და SNK ტესტი ჩატარდა მნიშვნელოვანი განსხვავებების არსებობის დასადგენად.
მაგიდა 4. ამ კვლევაში შეგროვებული და გენოტიპირებული პოპულაციების სია. თითოეული პოპულაციისთვის მოხსენებულია საიდენტიფიკაციო კოდი, ადგილობრივი სახელი, GPS კოორდინატი და გენური ბანკი, რომელიც იცავს თესლს.
კოდი | სახელი | GPS კოორდინატები | გენის ბანკი y |
ARO1 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°54’21.708″ N 16°49’1.631” E | Di.SSPA |
ARO2 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°53’14.28″ N 16°48’56.879” E | Di.SSPA |
ARO3 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°54’11.304″ N 16°49’13.079” E | Di.SSPA |
ARO4 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°54’3.348″ N 16°40’27.011” E | Di.SSPA |
ARO5 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°51’59.76″ N 16°53’0.527” E | Di.SSPA |
ARO6 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°52’48.72″ N 16°49’43.247” E | Di.SSPA |
ARO7 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°53’13.47″ N 16°50’23.783” E | Di.SSPA |
ARO8 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°53’18.816″ N 16°49’33.888” E | Di.SSPA |
ARO9 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°54'51.372″ N 16°49'3.504" E | Di.SSPA |
ARO10 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°54’1.188″ N 16°49’24.311” E | Di.SSPA |
ARO11 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°52'49.8″ N 16°49'48.575" E | Di.SSPA |
ARO12 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°52’38.892″ N 16°49’28.379” E | Di.SSPA |
ARO13 | Cipolla rossa di Acquaviva | 40°53’21.768″ N 16°49’29.711” E | Di.SSPA |
TRO1 | Cipolla rossa lunga di Tropea | - | Di.SSPA |
TRO2 | Cipolla rossa tonda di Tropea | - | Di.SSPA |
MCO | ციპოლა რამატა დი მონტორო | - | Di.SSPA |
y Di.SSPA, ნიადაგის, მცენარეთა და სურსათის მეცნიერებათა დეპარტამენტი, ბარის უნივერსიტეტი. |
თითო პოპულაციაზე 20 გენოტიპის ფოთლის მასალა იქნა აღებული და შენახული -80 °C ტემპერატურაზე გამოყენებამდე. პოლისაქარიდით მდიდარი სახეობებისთვის, როგორც A. cepa, პოლისაქარიდის მოცილების პირველი ნაბიჯები აუცილებელია კარგი ხარისხის დნმ-ის მისაღებად, ამიტომ პირველადი გამორეცხვები STE ბუფერში (0.25 M საქაროზა, 0.03 M Tris, 0.05 M EDTA) ჩატარდა, როგორც აღწერილია [52]. მთლიანი დნმ ამოღებულია CTAB მეთოდით [53] და ბოლოს, მისი ხარისხი და კონცენტრაცია შემოწმდა Nano Drop 2000 UV-vis სპექტროფოტომეტრით (ThermoScientific, Waltham, MA, აშშ) და 0.8% აგაროზის გელის ელექტროფორეზით.
SSR ანალიზი
EST-SSR პრაიმერის 16 კომბინაცია შემუშავებული [54] და ადრე გამოცდილი გენეტიკური მრავალფეროვნების კვლევებში [43] მდე [44] და 21 გენომიური სსრ [45-55] ჩატარდა სკრინინგი მათი ვარგისიანობის შესაფასებლად (დამატებითი ცხრილი S4). გენოტიპირება განხორციელდა ეკონომიკური ფლუორესცენტური ეტიკეტირების მეთოდის გამოყენებით, რომელშიც M13 კუდი ემატება თითოეულ წინდაწინ SSR პრაიმერს [56]. PCR მიქსები მომზადდა 20 გლ რეაქციაში, რომელიც შეიცავს: 50 ნგ მთლიანი დნმ, 0.2 მმ dNTP ნარევი, 1X PCR რეაქციის ბუფერი, 0.8 U DreamTaq დნმ პოლიმერაზა (Thermo Scientific, Waltham, MA, აშშ), 0.16 გმ საპირისპირო პრაიმერი. , 0.032 გ მფრინავი პრაიმერი გაფართოვდა M13 თანმიმდევრობით (5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3') და 0.08 გ უნივერსალური M13 პრაიმერი ეტიკეტირებული FAM ან NED ფლუორესცენტური საღებავებით (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, აშშ). PCR რეაქციები ჩატარდა SimpliAmp (Applied Biosystems, CA, აშშ) თერმოციკლერში შემდეგი პირობებით პრაიმერის წყვილების უმრავლესობისთვის: 94 °C 5 წუთის განმავლობაში, 40 ციკლი 94 °C 30 წმ, 58 °C. 45 წმ და 72 °C 45 წამის განმავლობაში და საბოლოო გახანგრძლივება 72 °C-ზე 5 წუთის განმავლობაში. რაც შეეხება ACM446-სა და ACM449-ს, შეხორცებით PCR იქნა გამოყენებული 60 °C-დან 55 °C-მდე ანეილით 10 ციკლის განმავლობაში, 30 ციკლი 55 °C-ზე, რასაც მოჰყვა საბოლოო გაფართოება 5 წუთით 72 °C-ზე. PCR პროდუქტები ჩატვირთეს 96 ჭაბურღილიან ფირფიტაში და შერეული 14 გ Hi-Di Formamide (Life Technologies, Carlsbad, CA, აშშ) და 0.5 გლ GeneScan 500 ROX Size Standard (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). ამპლიკონები გადაწყდა ABI PRISM 3100 Avant გენეტიკური ანალიზატორის (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) კაპილარული თანმიმდევრობის აპარატის საშუალებით, სადაც ალელები შეფასდა, როგორც კოდომინანტური და მინიჭებული იქნა GeneMapper პროგრამული უზრუნველყოფის ვერსიის 3.7 გამოყენებით.
პროგრამული უზრუნველყოფა GenAlEx 6.5 [57] და ცერვუსი 3.0.7 [58] გამოიყენებოდა ალელების რაოდენობის (Na), ეფექტური ალელების რაოდენობის (Ne), დაკვირვებული ჰეტეროზიგოტურობის (Ho), მოსალოდნელი ჰეტეროზიგოზობის (He), პოლიმორფული ინფორმაციის შემცველობის (PIC), შენონის ინფორმაციის ინდექსის (I) და ფიქსაციის ინდექსის (Fis) შესაფასებლად. ) თითოეული SSR ლოკუსისთვის.
გენეტიკური მრავალფეროვნების შეფასება
გენეტიკური ვარიაციის იერარქიული დაყოფა ხახვის პოპულაციებს შორის და შიგნით შეფასდა GenAlEx 6.5-ით [57] მოლეკულური დისპერსიის ანალიზით (AMOVA) 999 ჩატვირთვის საშუალებით მნიშვნელოვნების შესამოწმებლად. უფრო მეტიც, GenAlEx 6.5 პროგრამული უზრუნველყოფა გამოიყენებოდა თითოეულ პოპულაციაში მრავალფეროვნების შესაფასებლად Ho, He და Fis-ის საშუალო გამოთვლით ყველა SSR ადგილებზე.
პოპულაციის სტრუქტურა გამოტანილი იქნა ბაიესის მოდელზე დაფუძნებული კლასტერული ალგორითმით, რომელიც განხორციელდა STRUCTURE v.2.3.4 პროგრამაში. [59]. მონაცემთა ნაკრები შესრულდა რამდენიმე ჰიპოთეტური კლასტერებით (K), 1-დან 10-მდე, დაყენებული იყო ათი დამოუკიდებელი გაშვება ყოველ K მნიშვნელობზე. ყოველი გაშვებისთვის, შედეგების თანმიმდევრულობის გადამოწმების მიზნით, შესრულდა 100,000 დამწვრობის საწყისი პერიოდი და 100,000 Markov Chain Monte Carlo (MCMC) გამეორება დანამატის მოდელის და დამოუკიდებელი ალელური სიხშირეების მიხედვით პოპულაციებს შორის. ყველაზე სავარაუდო K მნიშვნელობა განისაზღვრა AK მეთოდის განხორციელებით, რომელიც აღწერილია მიერ [60], ვებ პროგრამაში STRUCTURE HARVESTER [61]. ცალკეული პოპულაცია მინიჭებული იყო კონკრეტულ კლასტერზე, როდესაც მისი წევრობის კოეფიციენტი (q-მნიშვნელობა) 0.7-ზე მაღალი იყო, წინააღმდეგ შემთხვევაში იგი განიხილებოდა შერეულ წარმოშობად.
ძირითადი კოორდინატების ანალიზი ჩატარდა ნეის გენეტიკური მანძილის მატრიცით გამოვლენილი გენეტიკური ურთიერთობის ნიმუშების ვიზუალიზაციის მიზნით (დამატებითი ცხრილი S5). ალელის სიხშირეებზე დაყრდნობით, აშენდა გენეტიკური მანძილის დენდროგრამა, რომელიც ახორციელებს არაწონიანი წყვილის ჯგუფის მეთოდს არითმეტიკული საშუალოების (UPGMA) კლასტერული ანალიზით POPTREEW პროგრამულ უზრუნველყოფაში. [62]. Bootstrapping იქნა გამოყენებული იერარქიული კლასტერიზაციისადმი ნდობის შესაფასებლად, მონაცემთა ნაკრების 100 ხელახალი შერჩევა. და ბოლოს, MEGA X პროგრამული უზრუნველყოფა [63] გამოიყენებოდა როგორც ხეების ხატვის პროგრამა.
დამატებითი მასალები: ამჟამად ხელმისაწვდომია ონლაინ რეჟიმში http://www.mdpi.com/2223-7747/9/2/260/s1. ცხრილი S1: ARO, MCO და TRO ნათურების მორფოლოგიური დახასიათება. ცხრილი S2: ჰეტეროზიგოტურობისა და ფიქსაციის ინდექსები გამოთვლილი ARO ლანდრასებისთვის და TRO და MCO ლანდშაფტებისთვის. ცხრილი S3: Fpt პარამეტრის წყვილი მნიშვნელობები. ცხრილი S4: კვლევაში გამოყენებული SSR-ების სია. ცხრილი S5. ნეის გენეტიკური მანძილის წყვილი პოპულაციის მატრიცა. სურათი S1: K მნიშვნელობების ხაზოვანი დიაგრამა, რომელიც იცვლება ევანოს დელტა K-ით.
ავტორი წვლილი CL-მ და LR-მ ჩაიფიქრეს კვლევა და დააპროექტეს ექსპერიმენტი; CL და PI-მ შეასრულეს მოლეკულური მარკერის ანალიზი; ARM-მა და VZ-მ შეასრულეს საველე ცდები; RM, SP, GR და CL ჩართული იყო მონაცემთა ანალიზში; RM და CL დაწერეს ხელნაწერი. ყველა ავტორმა წაიკითხა და დაეთანხმა ხელნაწერის გამოქვეყნებულ ვერსიას.
დაფინანსება: ეს ნამუშევარი დაფინანსდა აპულიის რეგიონული პროექტით „აპულის ბოსტნეულის სახეობების ბიომრავალფეროვნება“ - Programma di Sviluppo Rurale per la Puglia 2014-2020. მისურა 10-სოტომისურა 10.2; გრანტი CUP H92C15000270002, იტალია.
მადლობა: მადლობა გადაეცემა "Azienda Agricola Iannone Anna" და "Associazione produttori della vera cipolla rossa di Acquaviva" ექსპერიმენტში გამოყენებული მცენარეული მასალების მიწოდებისთვის.
ინტერესთა კონფლიქტი: ავტორები არ ინტერესდებიან ინტერესთა კონფლიქტის შესახებ.
ლიტერატურა
- 1. Stearn, WT რამდენი სახეობის Allium არის ცნობილი? კევი მაგ. 1992, 9180-182 წწ. [CrossRef]
- 2. FAOSTAT. FAO-ს სტატისტიკური მონაცემთა ბაზა. ხელმისაწვდომია ონლაინ: http://www.fao.org/2017 (წვდომა 8 წლის 2019 იანვარს).
- 3. ბლოკი, E. ნივრის და ხახვის ქიმია. მეცნიერება. Ვარ. 1985, 252114-119 წწ. [CrossRef]
- 4. ლი, ბ. იუნგი, JH; Kim, HS წითელი ხახვის შეფასება ანტიოქსიდანტურ აქტივობაზე ვირთხებში. კვების ქიმ. ტოქსიკოლი. 2012, 50, 3912-3919. [CrossRef]
- 5. ლი, სმ. მთვარე, ჯ. ჩუნგი, ჯჰ; ჩა, იჯ; შინი, MJ კვერცეტინით მდიდარი ხახვის ქერქის ექსტრაქტების ეფექტი ვირთხების არტერიულ თრომბოზზე. კვების ქიმ. ტოქსიკოლი. 2013, 57, 99-105. [CrossRef] [PubMed]
- 6. იოშინარი, ო. შიოჯიმა, ი. Igarashi, K. ხახვის ექსტრაქტის სიმსუქნის საწინააღმდეგო ეფექტი ცუკერის დიაბეტიან ცხიმოვან ვირთხებში. ნუტრიენტები 2012, 4,1518-1526. [CrossRef]
- 7. Akash, MSH; რეჰმანი, კ. Chen, S. Spice plant Allium cepa: დიეტური დანამატი ტიპი 2 შაქრიანი დიაბეტის სამკურნალოდ. კვების 2014, 301128-1137 წწ. [CrossRef] [PubMed]
- 8. ვანგი, ი. ტიანი, WX; Ma, XF ხახვის ინჰიბიტორული ეფექტები (Allium cepa ლ.) ექსტრაქტი კიბოს უჯრედების და ადიპოციტების პროლიფერაციის შესახებ ცხიმოვანი მჟავას სინთეზის ინჰიბირებით. აზიური პაკ. J. კიბოს წინა. 2012,13, 5573-5579. [CrossRef] [PubMed]
- 9. ლაი, WW; ჰსუ, სკ; ჩუეჰ, ფს; ჩენი, YY; იანგი, JS; Lin, JP; Lien, JC; ცაი, ჩ.შ; Chung, JG Quercetin აფერხებს მიგრაციას და SAS ადამიანის პირის ღრუს კიბოს უჯრედების შეჭრას NF-kappaB და მატრიქსის მეტალოპროტეინაზა-2/-9 სასიგნალო გზების დათრგუნვის გზით. კიბოს საწინააღმდეგო რეზ. 2013, 331941-1950 წწ. [PubMed]
- 10. ნიკასტრო, HL; როსი, SA; მილნერი, JA ნიორი და ხახვი: მათი კიბოს პრევენციის თვისებები. კიბოს წინა. რეზ. 2015, 8,181-189. [CrossRef]
- 11. ფორტე, ლ. ტორიჩელი, პ. ბოანინი, ე. გაზანო, მ. რუბინი, კ. ფინი, მ. ბიგი, ა. კვერცეტინის ფუნქციონალიზებული ჰიდროქსიაპატიტის ანტიოქსიდანტური და ძვლის აღდგენითი თვისებები: ოსტეობლასტ-ოსტეოკლასტ-ენდოთელური უჯრედების კოკულტურის კვლევა in vitro. Acta Biomater. 2016, 32, 298-308. [CrossRef]
- 12. იამაზაკი, ი. ივასაკი, კ. მიქამი, მ. იაგიჰაში, ა. თერთმეტი არომატის წინამორბედების, S-Alk(en)yl-L-ცისტეინის წარმოებულების განაწილება შვიდ ალიუმის ბოსტნეულში. კვების მეცნიერება. ტექნოლ. რეზ. 2011, 17, 55-62. [CrossRef]
- 13. Block, E. Allium-ის გვარის ორგანოგოგირდის ქიმია - გოგირდის ორგანული ქიმიის შედეგები. ანგეუ. ქიმ. ინტ. რედ. ინგლ. 1992, 311135-1178 წწ. [CrossRef]
- 14. გრიფიტსი, გ. ტრუმენი, ლ. კროუტერი, თ. თომასი, ბ. სმიტი, B. ხახვი - გლობალური სარგებელი ჯანმრთელობისთვის. ფიტოტერი. რეზ. 2002,16, 603-615. [CrossRef]
- 15. შვიმერი, ს. ვესტონი, WJ პირუვიკის მჟავას ფერმენტული განვითარება ხახვში, როგორც სიმკვეთრის საზომი. ჯ.აგრიკ. კვების ქიმ. 1961, 9, 301-304. [CrossRef]
- 16. კეტერი, კატა; Randle, WM პინგის შეფასება ხახვში. In აპრობირებული კვლევები ლაბორატორიული სწავლებისთვის; კარჩერი, SJ, რედ.; ბიოლოგიის ლაბორატორიული განათლების ასოციაცია (ABLE): New York, NY, USA, 1998; ტომი 19, გვ 177-196.
- 17. Hanelt, P ტაქსონომია, ევოლუცია და ისტორია. In ხახვი და მოკავშირე კულტურები, ტ. I. ბოტანიკა, ფიზიოლოგია და გენეტიკა; Rabinowitch, HD, Brewster, JL, Eds.; CRC Press: Boca Raton, FL, USA, 1990; გვ 1-26.
- 18. რაბინოვიჩი, HD; კურაჰ, ლ. Allium Crop Science: უახლესი მიღწევები; CABI Publishing: Wallingford, დიდი ბრიტანეთი, 2002 წ.
- 19. მალორი, კ. კარავედო, მ. ესტოპანანი, გ. მალორი, ფ. ხახვის გენეტიკური რესურსების დახასიათება (Allium cepa ლ.) მრავალფეროვნების ესპანური მეორადი ცენტრიდან. სპანი. ჯ.აგრიკ. რეზ. 2011, 9144-155 წწ. [CrossRef]
- 20. ფერიოლი, ფ. D'Antuono, LF ფენოლის და ცისტეინის სულფოქსიდების შეფასება ადგილობრივ ხახვსა და შალოტის ჩანასახში იტალიიდან და უკრაინიდან. გენეტი. რესურსი. Crop Evol. 2016, 63, 601-614. [CrossRef]
- 21. პეტროპულოსი, ს.ა.; ფერნანდესი, ა. ბაროსი, ლ. ფერეირა, ICFR; ნტაცი, გ. „ვატიკიოტიკოს“ მორფოლოგიური, კვების და ქიმიური აღწერა, ხახვის ადგილობრივი ლანდშაფტი საბერძნეთიდან. საკვები ქ. 2015,182156-163 წწ. [CrossRef]
- 22. ლიგუორი, ლ. ადილეტა, გ. ნაზარო, ფ. ფრატიანი, ფ. დი მატეო, მ. ალბანური, დ. ხახვის სხვადასხვა ჯიშის ბიოქიმიური, ანტიოქსიდანტური თვისებები და ანტიმიკრობული აქტივობა ხმელთაშუა ზღვის ზონაში. J. Food Meas. პერსონაჟი. 2019,131232-1241 წწ. [CrossRef]
- 23. იოო, კს; პაიკი, ლ. კროსბი, კ. ჯონსი, რ. ლესკოვარი, დ. ხახვის სიმკვეთრის განსხვავებები ჯიშების, ზრდის გარემოს და ბოლქვების ზომების გამო. მეცნიერება. ჰორტიკი. 2006,110144-149 წწ. [CrossRef]
- 24. ფუტკარი, ნ. პერნერი, ჰ. შვარცი, დ. გიორგი, ე. Kroh, LW; Rohn, S. კვერცეტინ-3, 4'-O-დიგლუკოზიდის, კვერცეტინ-4'-O-მონოგლუკოზიდისა და კვერცეტინის განაწილება ხახვის ბოლქვის (Allium cepa L.) სხვადასხვა ნაწილში გენოტიპის გავლენით. საკვები ქ. 2010,122, 566-571. [CrossRef]
- 25. კარუზო, გ. კონტი, ს. ვილარი, გ. ბორელი, ჩ. მელქიონნა, გ. მინუტოლო, მ. რუსო, გ. ამალფიტანო, C. გადარგვის დროისა და მცენარის სიმკვრივის ეფექტი ხახვის მოსავალზე, ხარისხსა და ანტიოქსიდანტურ შემცველობაზე (Allium cepa L.) სამხრეთ იტალიაში. მეცნიერება. ჰორტიკი. 2014,166111-120 წწ. [CrossRef]
- 26. პერეს-გრეგორიო, მ.რ; რეგუირო, ჯ. სიმალ-განდარა, ჯ. როდრიგესი, AS; ალმეიდა, DPF ხახვის დამატებითი ღირებულების გაზრდა, როგორც ანტიოქსიდანტური ფლავონოიდების წყარო: კრიტიკული მიმოხილვა. კრიტიკოსი. სურსათის მეცნიერება Nutr. 2014, 54,1050-1062. [CrossRef] [PubMed]
- 27. პონლი, თ. შვაიგერტი, RM; კარლე, რ. გაშენების მეთოდისა და ჯიშის შერჩევის გავლენა ხახვში ხსნად ნახშირწყლებზე და მკვეთრ პრინციპებზე (Allium cepa ლ.). ჯ.აგრიკ. კვების ქიმ. 2018, 6612827-12835 წწ. [CrossRef] [PubMed]
- 28. ტედესკო, ი. კარბონი, ვ. სპაგნუოლო, ჩ. მინასი, პ. Russo, GL ფლავონოიდების იდენტიფიკაცია და რაოდენობრივი განსაზღვრა სამხრეთ იტალიის ორი ჯიშიდან ალიუმ ცეპა L., Tropea (წითელი ხახვი) და Montoro (სპილენძის ხახვი) და მათი უნარი დაიცვან ადამიანის ერითროციტები ოქსიდაციური სტრესისგან. ჯ.აგრიკ. კვების ქიმ. 2015, 63, 5229-5238. [CrossRef]
- 29. ვილანო, ჩ. ესპოზიტო, ს. კარუჩი, ფ. ფრუსიანტე, ლ. კარპუტო, დ. Aversano, R. მაღალი გამტარუნარიანობის გენოტიპირება ხახვში ავლენს გენეტიკური მრავალფეროვნების სტრუქტურას და ინფორმაციულ SNP-ებს, რომლებიც სასარგებლოა მოლეკულური გამრავლებისთვის. მოლ. ჯიშის. 2019, 39, 5. [CrossRef]
- 30. მერკატი, ფ. ლონგო, ჩ. პომა, დ. არანიტი, ფ. ლუპინი, ა. მამანო, მ.მ. ფიორე, MC; აბენავოლი, მ.რ. Sunseri, F იტალიური ხანგრძლივი შენახვის ვადა პომიდვრის გენეტიკური ვარიაცია (Solanum lycopersicum ლ.) შეგროვება SSR და მორფოლოგიური ნაყოფის ნიშნების გამოყენებით. გენეტი. რესურსი. Crop Evol. 2014, 62, 721-732. [CrossRef]
- 31. გონსალეს-პერესი, ს. მალორი, კ. გარსეს-კლავერი, ა. მერინო, ფ. ტაბოადა, ა. რივერა, ა. პომარი, ფ. პეროვიჩი, დ. Silvar, C. გენეტიკური მრავალფეროვნებისა და ხარისხის მახასიათებლების შესწავლა ხახვის კოლექციაში (Allium cepa ლ.) ლანდშაფტები ჩრდილო-დასავლეთ ესპანეთიდან. გენეტიკა 2015, 47, 885-900. [CrossRef]
- 32. ლოტი, ჩ. იოვიენო, პ. ცენტომანი, ი. მარკოტრიჯიანო, AR; ფანელი, ვ. მიმიოლა, გ. სუმო, ჩ. პავანი, ს. Ricciardi, L. კომბოსტოს გენეტიკური, ბიო-აგრონომიული და კვების დახასიათება (Brassica oleracea L. var. აცეფალა) მრავალფეროვნება აპულიაში, სამხრეთ იტალიაში. მრავალფეროვნება 2018,10, 25. [CrossRef]
- 33. ბარდარო, ნ. მარკოტრიჯიანო, AR; ბრაკუტო, ვ. მაზეო, რ. რიკარდი, ფ. ლოტი, ჩ. პავანი, ს. Ricciardi, L. გენეტიკური ანალიზი წინააღმდეგობის ორობანჩე კრენატა (ფორსკ.) ბარდაში (Pisum sativum ლ.) დაბალი სტრიგოლაქტონის ხაზი. J. მცენარეთა პათოლი. 2016, 98, 671-675.
- 34. ვაკო, თ. ცუკაზაკი, ჰ. იაგუჩი, ს. იამაშიტა, კ. იტო, ს. Shigyo, M. რაოდენობრივი ნიშან-თვისებების ადგილის რუკება ხახვში დაყრის დროისთვის (ალიუმ ფისტულოზი ლ.). ევფიტიკა 2016, 209, 537-546. [CrossRef]
- 35. დაკა, ნ. მუხოპადიაი, ა. პარიტოში, კ. გუფთა, ვ. პენტალი, დ. Pradhan, AK გენეტიკური SSR-ების იდენტიფიკაცია და SSR-ზე დაფუძნებული კავშირის რუქის აგება Brassica juncea. ევფიტიკა 2017, 213, 15. [CrossRef]
- 36. ანანდანი, ს. მოტე, SR; Gopal, J. ხახვის ჯიშური იდენტობის შეფასება SSR მარკერების გამოყენებით. Seed Sci. ტექნოლ. 2014, 42, 279-285. [CrossRef]
- 37. მიტროვა, კ. სვობოდა, პ. Ovesna, J. ჩეხეთის რესპუბლიკიდან ხახვის ჯიშების დიფერენციაციის მარკერის ნაკრების შერჩევა და დადასტურება. ჩეხი ჯ.გენეტი. მცენარის ჯიში. 2015, 51, 62-67. [CrossRef]
- 38. დი რიენცო, ვ. Miazzi, MM; ფანელი, ვ. საბეტა, ვ. Montemurro, C. აპულიური ზეთისხილის გერპლაზმის ბიომრავალფეროვნების შენარჩუნება და დახასიათება. აქტა ჰორტიკი. 2018,1199,1-6. [CrossRef]
- 39. მალორი, კ. არნედო-ანდრეს, ა. Garces-Claver, A. ესპანური ენის გენეტიკური მრავალფეროვნების შეფასება ალიუმ ცეპა ლანდშაფტები ხახვის მოშენებისთვის მიკროსატელიტური მარკერების გამოყენებით. მეცნიერება. ჰორტიკი. 2014,17024-31 წწ. [CrossRef]
- 40. რივერა, ა. მალორი, კ. გარსეს-კლავერი, ა. გარსია-ულოა, ა. პომარი, ფ. Silvar, C. ხახვში გენეტიკური მრავალფეროვნების შეფასება (ალიუმ ცეპა ლ.) ლანდშაფტები ჩრდილო-დასავლეთ ესპანეთიდან და შედარება ევროპულ ცვალებადობასთან. NZJ Crop Hortic. 2016, 44103-120 წწ. [CrossRef]
- 41. დე ჯოვანი, ჩ. პავანი, ს. ტარანტო, ფ. დი რიენცო, ვ. Miazzi, MM; მარკოტრიჯიანო, AR; მანგინი, გ. მონტემურო, კ. რიკარდი, ლ. Lotti, C. წიწაკის გლობალური გერპლაზმის კოლექციის გენეტიკური ვარიაცია (Cicer arietinum ლ.) გენეტიკური ეროზიის რისკის ქვეშ მყოფი იტალიური შეერთებების ჩათვლით. ფიზიოლ. მოლ. ბიოლ. მცენარეები 2017, 23197-205 წწ. [CrossRef]
- 42. მაზეო, რ. მორგეზე, ა. სონანტი, გ. ზულუაგა, DL; პავანი, ს. რიკარდი, ლ. Lotti, C. გენეტიკური მრავალფეროვნება ბროკოლის რაბაში (ბრასიკა რაპა L. subsp. სილვესტრისი (ლ.) იანჩ.) სამხრეთ იტალიიდან. მეცნიერება. ჰორტიკი. 2019, 253140-146 წწ. [CrossRef]
- 43. ჯაკსე, მ. მარტინი, ვ. მაკკალუმი, ჯ. Havey, M. ერთი ნუკლეოტიდური პოლიმორფიზმი, ინდელები და მარტივი თანმიმდევრობის გამეორებები ხახვის ჯიშის იდენტიფიკაციისთვის. ჯ.ამ. სოც. ჰორტიკი. მეცნიერება. 2005,130, 912-917. [CrossRef]
- 44. მაკკალუმი, ჯ. ტომსონი, ს. პიტერ-ჯოისი, მ. Kenel, F. გენეტიკური მრავალფეროვნების ანალიზი და ერთნუკლეოტიდური პოლიმორფიზმის მარკერის განვითარება კულტივირებულ ნათურ ხახვში გამოხატული თანმიმდევრობის ტეგ-მარტივი მიმდევრობის განმეორებითი მარკერების საფუძველზე. ჯ.ამ. სოც. ჰორტიკი. მეცნიერება. 2008,133, 810-818. [CrossRef]
- 45. ბოლდუინი, ს. პიტერ-ჯოისი, მ. რაიტი, კ. ჩენი, ლ. McCallum, J. ძლიერი გენომიური მარტივი თანმიმდევრობის განმეორებითი მარკერების შემუშავება გენეტიკური მრავალფეროვნების შესაფასებლად ბოლქვის ხახვის შიგნით და მათ შორის (Allium cepa ლ.) პოპულაციები. მოლ. ჯიშის. 2012, 301401-1411 წწ. [CrossRef]
- 46. დე ვუდი, ჯა. Honeycutt, RL; Skow, LC მიკროსატელიტური მარკერები თეთრკუდიან ირმებში. ჯ ჰერედი. 1995, 86, 317-319. [CrossRef] [PubMed]
- 47. ხოდადადი, მ. Hassanpanah, D. ირანული ხახვი (Allium cepa ლ.) კულტურების პასუხები შეჯვარების დეპრესიაზე. მსოფლიო აპლიკაცია. მეცნიერ. ჯ. 2010,11, 426-428.
- 48. აბდუ, რ. ბაკასო, ი. საადუ, მ. ბაუდოინი, ჯ.პ. Hardy, OJ ნიგერის ხახვის გენეტიკური მრავალფეროვნება (Allium cepa L.) შეფასებული მარტივი მიმდევრობის განმეორებითი მარკერებით (SSR). აქტა ჰორტიკი. 2016,1143, 77-90. [CrossRef]
- 49. პავანი, ს. ლოტი, ჩ. მარკოტრიჯიანო, AR; მაზეო, რ. ბარდარო, ნ. ბრაკუტო, ვ. რიკარდი, ფ. ტარანტო, ფ. დ'აგოსტინო, ნ. სქიავული, ა. და სხვ. განსხვავებული გენეტიკური კლასტერი კულტივირებულ წიწილაში, რომელიც გამოვლინდა გენომის მასშტაბით მარკერის აღმოჩენითა და გენოტიპებით. მცენარის გენომი 2017, 2017,10. [CrossRef]
- 50. პავანი, ს. მარკოტრიჯიანო, AR; ციანი, ე. მაზეო, რ. ზონო, ვ. რუჯიერი, ვ. ლოტი, ჩ. Ricciardi, L. ნესვის გენოტიპირება-მიმდევრობა (Cucumis melo L.) მრავალფეროვნების მეორადი ცენტრიდან გერპლაზმის შეგროვება ხაზს უსვამს გენეტიკური ვარიაციის ნიმუშებს და სხვადასხვა გენოფონდის გენომურ მახასიათებლებს. BMC გენომი. 2017, 18, 59. [CrossRef]
- 51. დი რიენცო, ვ. სიონი, ს. ტარანტო, ფ. დ'აგოსტინო, ნ. მონტემურო, კ. ფანელი, ვ. საბეტა, ვ. ბუშეფა, ს. თამენჯარი, ა. პასკალონი, ა. და სხვ. გენეტიკური ნაკადი ზეთისხილის პოპულაციაში ხმელთაშუა ზღვის აუზში. პეერ ჯ. 2018, 6. [CrossRef]
- 52. მწყემსი, LD; McLay, TG ორი მიკრო მასშტაბის პროტოკოლი დნმ-ის იზოლაციისთვის პოლისაქარიდით მდიდარი მცენარეული ქსოვილისგან. J. Plant Res. 2011,124, 311-314. [CrossRef]
- 53. დოილი, ჯ.ჯ. Doyle, JL მცენარის დნმ-ის იზოლაცია ახალი ქსოვილისგან. ფოკუსი 1990,1213-14 წწ.
- 54. Kuhl, JC; ჩეუნგი, ფ. ქიაოპინგი, ი. მარტინი, ვ. ზეუდი, ი. მაკკალუმი, ჯ. კატანახი, ა. რეზერფორდი, პ. ნიჟარა, KC; ჯენდრეკი, მ. და სხვ. უნიკალური ნაკრები 11,008 ხახვი გამოხატული თანმიმდევრობით ტეგებით ავლენს გამოხატულ თანმიმდევრობასა და გენომურ განსხვავებებს ასპარაგალებსა და პოალებს შორის. მცენარეული უჯრედი 2004,16, 114-125. [CrossRef]
- 55. Kim, HJ; ლი, HR; Hyun, JY; სიმღერა, KH; კიმ, KH; კიმ, ჯეი; ჰური, CG; Harn, CH მარკერის შემუშავება ხახვის გენეტიკური სისუფთავის ტესტირებისთვის SSR Finder-ის გამოყენებით. კორეელი J. ჯიში. მეცნიერება. 2012, 44, 421-432. [CrossRef]
- 56. Schuelke, M. PCR ფრაგმენტების ფლუორესცენტური მარკირების ეკონომიკური მეთოდი. ნატ. ბიოტექნოლოგი. 2000, 18, 233-234. [CrossRef] [PubMed]
- 57. პიკალი, რ. Smouse, PE GenAlEx 6.5: გენეტიკური ანალიზი Excel-ში. პოპულაციის გენეტიკური პროგრამული უზრუნველყოფა სწავლებისა და კვლევისთვის: განახლება. ბიოინფორმატიკა 2012, 28, 2537-2539. [CrossRef] [PubMed]
- 58. კალინოვსკი, სტ. Taper, ML; მარშალი, TC იმის გადახედვა, თუ როგორ არეგულირებს კომპიუტერული პროგრამა CERVUS გენოტიპის შეცდომებს, ზრდის წარმატებას მამობის მინიჭებაში. მოლ. ეკოლ. 2007,161099-1106 წწ. [CrossRef]
- 59. პრიჩარდი, ჯ.კ; სტეფენსი, მ. როზენბერგი, NA; Donnelly, P. ასოციაციის რუქა სტრუქტურირებულ პოპულაციებში. Ვარ. J. Hum. გენეტი. 2000, 67, 170-181. [CrossRef]
- 60. ევანო, გ. რეგნაუტი, ს. Goudet, J. პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით ინდივიდების კლასტერების რაოდენობის გამოვლენა. სტრუქტურა: სიმულაციური კვლევა. მოლ. ეკოლ. 2005,14, 2611-2620. [CrossRef]
- 61. ერლი, დ. VonHoldt, B. STRUCTURE HARVESTER: ვებსაიტი და პროგრამა STRUCTURE გამომავალი ვიზუალიზაციისა და Evanno მეთოდის დანერგვისთვის. კონსერვაცია. გენეტი. რესურსი. 2011, 4. [CrossRef]
- 62. ტაკეზაკი, ნ. ნეი, მ. თამურა, კ. POPTREEW: POPTREE-ს ვებ ვერსია ალელური სიხშირის მონაცემებიდან პოპულაციის ხეების ასაგებად და ზოგიერთი სხვა სიდიდის გამოთვლისთვის. მოლ. ბიოლ. ევოლ. 2014, 31, 1622-1624. [CrossRef]
- 63. კუმარი, ს. სტეჩერი, გ. ლი, მ. კნიაზი, ჩ. თამურა, კ. MEGA X. მოლეკულური ევოლუციური გენეტიკური ანალიზი გამოთვლით პლატფორმებზე. მოლ. ბიოლ. ევოლ. 2018, 351547-1549 წწ. [CrossRef]